flag的coip步骤,免疫共沉淀实验的应用

flag的coip步骤,免疫共沉淀实验的应用

＋＾＋ 1.IP前的准备工作：coIP：分为内源性蛋白质相互作用和非内源性蛋白质相互作用（后者包括性外源性蛋白质和外源性龙内源性蛋白质）。 非内源蛋白的相互作用主要通过过度表达实现，通常被简化。然而，与传统IP相比，CoIP需要更多的护理和更多的生理相关条件。 如果成功，Co-IP不仅会拉下您感兴趣的蛋白质，还会拉下它的相互作用伙伴。 因此，Co-IP是鉴定蛋白质复合物的好方法

COIP实验流程CO-IP实验详细说明1.详细实验材料请参考WesternBlot实验详细说明2.实验原理免疫共沉淀（CO-IP）是一种在体外检测两个蛋白质分子之间是否存在特异性相互作用的方法。 方法。 当然，并不是所有的蛋白都有相应的IP级抗体。当找不到合适的抗体时，可以表达融合了Flag标签的蛋白，并利用Flag标签进行免疫沉淀。 4.操作步骤1.用预冷的PBS洗涤细胞3次，最后一次吸干PBS。

ˋ０ˊ 因此，Co-IP的实验步骤大致可以概括为以下四个步骤：1）裂解蛋白质得到蛋白质混合物；2）将目标蛋白质的抗体与蛋白质混合物一起孵育；3）洗脱得到下拉的蛋白质； 4)然后使用下拉的蛋白作为样本，并用它与26和flag交互。DirectIP不需要IP缓冲液冲洗，并且没有发现对CO结果的明显干扰。 通常，再生珠需要添加大量的甘油，因为它们在零下20度时更换以延长保质期。直接使用时，不需冲洗，不易将珠子分离均匀，导致管子不同。

1.CoIP实验如何选择标签和标签抗体？ CoIP在动物细胞中常用的标签有HA、Flag、GFP和MYC等，而His和GST常用于原核细胞蛋白纯化。哺乳动物细胞中，由于非分泌蛋白本身组氨酸背景较高，实验中有四张图。 胶图分别为IB:Myc,IB:FLAG(这两张胶图为阳性对照),IP:FLAGIB:FLAG(IP组),IP:FLAGIB:Myc(Co-IP组),基本情况得到后,分析开始:下面两张胶图用IB来验证Myc-

●▽● 洗去未结合的蛋白质后，用洗脱液将相互作用的蛋白质复合物从珠子上洗脱下来，以获得免疫共沉淀的CoIP产品。 CoIP产品可用于通过WesternBlot检测已知蛋白质或通过质谱检测未知蛋白质。 当没有合适的诱饵蛋白抗体时，COIP实验步骤COIP实验步骤CO-IP实验详细说明1.详细实验材料请参见WesternBlot实验详细说明2.实验原理免疫共沉淀（CO-IP）是体外检测两种蛋白质分子之间是否存在特异性相互作用