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IP的igG也有带 |
ip实验组会出现轻链吗,避免抗重轻链二抗原理的措施
捕获抗体同时分离,抗体IgG重链(55kD)和轻链(25kD)可能与后续二抗发生交叉反应。10.Co-IP实验中如何消除重链和轻链的影响? 目前商业化的纳米抗体可以有效避免这种情况,或者可以通过在WB过程中使用特定的二抗来消除这种情况。 11.Co-IP中未检测到与目标蛋白的相互作用。
IPKine系列新型二抗产品,可有效解决IP-WB后的轻/重链干扰问题。 IPK系列二抗经过特别优化,不会与IgG的轻链/重链分子结合,而仅识别IgG分子的重链/轻链部分,可有效解决IP实验后免疫球蛋白分子含有四条肽链的问题。 相同的短链称为轻链(Lchain),两条相同的长链称为重链(Hchain)。链之间通过二硫键连接。两条链各有一个常数部分和一个可变部分,所以
但必须使用相同的一抗或同一物种的一抗。这种情况下,如果使用常规抗IgG(H+L)酶标二抗,WB实验中IP抗体变性后产生的重链(55kDa)和轻链(25kDa)都能被识别,并且在煮的过程中,这种非特异性IP抗体会被破坏。kenint重链+轻链。 在SDS-PAGE电泳过程中,重链、轻链和ProteinA一起出现! 2.三带是怎样形成的? 当IP抗体和WB抗体使用相同的、或相同的来源(如兔)时。 由于SDS-P
在免疫沉淀实验后的WB验证中,当使用常规Anti-IgG(H+L)酶标二抗时,对应重链(50kDa)、轻链(50kDa)和轻链(25kDa)两条带。 如果IP实验中使用待测卵子,很容易造成IgG重链和轻链的干扰,严重影响结果的判断。 因此,如果你想知道如何减少这些干扰,你必须首先了解这些干扰是如何产生的。 下图是IP复合体(IPComplex)的结构
o(╯□╰)o 非特异性吸附后的二抗不会交叉识别其他物种抗体的重链和轻链,具有良好的特异性,在使用特定一抗进行IP实验时也是非常好的二抗产品。 Elabscience®推出的标记抗体快速沉淀试剂盒对抗体进行了轻链和重链的断裂,此时如果IP抗体来源与WB抗体来源相同,则会被常规抗IgG(H+L)取代(H+L表示免疫原使用的是抗体轻链和重链(Heavychain+Lightchain)酶标二抗认可,这将在开发过程中出现。
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