coip磁珠法实验步骤,coip磁珠保存

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它不会被消耗，所以我买了它（如图4）-以下是Co-IP的详细步骤：1⃣️首先，我们需要使用细胞来共同表达我们想要验证的两种相互作用的蛋白质，并且这两种蛋白质有不同的标签，例如常用的标签sareflag、HA、Myc等。 悲伤的表情。还有无数的公司、产品和套件可供选择。所以请做好尝试和错误的准备！

1.取两支1.5mlEP管，每管加入400ul总蛋白，然后加入100ulRIPA裂解缓冲液，补充液500ul，一管加入5ug目标抗体，另一管加入5ugrabbitIgG，4℃旋转孵育过夜。 2.取两个1.5mlEP管，分别加入细胞：获得总蛋白溶液、细胞裂解液和抗体孵育：蛋白-抗体复合物磁珠和蛋白-抗体复合物孵育：蛋白-抗体-磁珠复合物洗涤：去除非特异性结合蛋白洗脱：蛋白-抗

Co-IP实验步骤1.细胞样品的制备1.10cm左右的细胞用PBS洗涤两次，加入1mLRIPA裂解液和10μLPMSF（从100mM稀释至1mM）；2.充分混匀并移液，lyseonice4小时，充分移液并吸入1.5mLEP管中，-80-实验方法1.1获得细胞裂解液1.Cul活化细胞直至其状态良好，吸出培养基，加入5mlPBS，左右摇匀，洗涤细胞一次2.加入1ml胰蛋白酶消化，消化完成后，加入2ml完全培养基

进一步解析后得到抗原-蛋白质复合物，然后对蛋白质进行检测（WesternBlotor质谱）以获得蛋白质之间相互作用的信息。 了解完实验原理后，我们来看一下操作。简单的Co-IP实验流程是收集蛋白样品、沉淀诱饵蛋白、SDS-PAGE和WB检测实验。 异性结合"磁珠+抗体X+抗体

因此，多阅读英文Protocol也有利于后续SCI论文的提交。 本文是Ryan与我们分享的使用磁珠法进行免疫共沉淀的实验方案。它与传统的ProteinA/GCo-IP仍有不同。但是，磁珠法方便、快速、高效，并且使用磁珠偶联抗体来沉淀诱饵蛋白：在样品中添加磁珠偶联抗体。抗体将与诱饵蛋白结合。将使用磁铁顶部磁珠完全落下，诱饵蛋白就会一起沉淀。 如果有目标蛋白与诱饵蛋白相互作用，